Поиск 22 частых мутаций и полиморфизма IVS8TT в гене CFTR при бесплодии (4.1.21)

Метод исследования: ПЦР и рестрикционный анализ.

Данное исследование позволяет дифференцировать бесплодие, ассоциированное  с заболеванием муковисцидоз, от других видов генетически обусловленного бесплодия, выявить носительство мутаций этого заболевания, что актуально при планировании рождения ребенка и подтверждения диагноза муковисцидоза.

Муковисцидоз - наследственное заболевание, характеризующееся системным поражением экзокринных желез организма и обусловлен патогенными мутациями в гене трансмембранного регулятора муковисцидоза (CFTR).

Он входит в число наиболее частых наследственных заболеваний. Согласно данным Всемирной организации здравоохранения, в среднем в мире, встречается с частотой 1:2500–3000 новорожденных. Заболевание, связанное с наличием мутаций в гене CFTR (Cystic Fibrosis Transmembraneconductance Regulator), наследуемое  по аутосомно-рецессивному типу. Это означает, что если мужчина и женщина являются носителями одной и той же мутации вероятность рождения ребенка с муковисцидозом составит 25 %. Если у обоих родителей диагностирован муковисцидоз, то ребенок неизбежно будет болен. Если один из будущих родителей болен муковисцидозом, а другой является носителем муковисцидоза, тогда вероятность рождения ребенка с муковисцидозом составит 50 %. В остальных 50 % случаев он будет клинически здоровым носителем заболевания.

Этот ген расположен на длинном плече 7-й хромосомы. Он кодирует АТФ-связывающий белок, который формирует канал для ионов хлора в клеточных стенках. Заболевание характеризуется поражением экзокринных желез с вовлечением многих жизненно важных органов и систем (прежде всего, дыхательного и желудочно-кишечного тракта), с тяжелым течением.

Развитие  той или иной формы заболевания зависит от мутаций в гене CFTR. Наиболее частой является делеция del F508. Частота ее в России составляет около 55%. Всего же в гене CFTR описано свыше 700 мутаций, большинство из которых являются очень редкими. Следствием мутаций в гене CFTR является нарушение транспорта электролитов и ионов хлора через мембраны эпителиальных клеток, а это в  свою очередь сопровождается  секрецией густой слизи и закупоркой выводящих протоков различных желез. Ген CFTR экспрессируется в различных тканях (почки, поджелудочная железа, кишечник, сердце, семявыносящие протоки, легкие, протоки потовых желез и др.). Этот же мембранный белок CFTR одновременно оказывает влияние на формирование семявыбрасывающих протоков, семенных пузырьков, семявыносящих протоков и дистальных 2/3 придатков яичек.

У мужчин, страдающих муковисцидозом, половое развитие не нарушено, не нарушена выработка половых гормонов и функция половых  желез.  Однако семявыносящие протоки чаще всего либо отсутствуют, либо заблокированы густой слизью. Этим и объясняется возникновение бесплодия. Довольно часто врожденное двустороннее отсутствие семявыносящего протока, ассоциированного с мутацией в гене  CFTR, является единственным признаком болезни или имеются умеренной степени выраженности клинические проявления муковисцидоза. Отсутствие семявыносящих протоков наблюдается у 2% бесплодных мужчин и 6% страдающих обструктивной азооспермией. В настоящее время известно, что частота носительства для отдельных мутаций муковисцидоза у бесплодных мужчин значительно выше (12%), чем частота носительства тех же мутаций в обычной популяции (3%). Отличительными особенностями спермограмм мужчин, имеющих различные мягкие мутации гена муковисцидоза, являются олигоастенотератозооспермия, изолированная олигозооспермия, азооспермия неясного генеза, сниженный объём семенной плазмы, отсутствие или низкая концентрация фруктозы, патологическая вязкость эякулята. Также с нарушением фертильности у мужчин связывают вариант 5Т полиморфизма ТТ в 8-м интроне гена CFTR.

Всех мужчин с азооспермией следует очень тщательно обследовать на предмет врожденного двустороннего отсутствия семявыносящего протока и проводить анализ гена CFTR.

Если у мужчины в процессе обследования  выявлено носительство мутации в гене CFTR, необходимо провести молекулярно-генетическое тестирование партнерши.

Перечень исследуемых мутаций: (NM_000492) (c.54-5940_273+10250del21kb (CFTRdele2,3), c.1521_1523delCTT (F508del), c.2051_2052delAAinsG (2183AA>G), c.1545_1546delTA (1677delTA), c.2012delT (2143delT), c.2052dupA (2184insA), c.262_263delTT (394delTT), c.3691delT (3821delT), c.413_415dupTAC (L138ins), c.1624G>T (G542X), c.3846G>A (W1282X), c.3909C>G (N1303K), c.1000C>T (R334W), c.3718-2477C>T (c.3717+12191C>T; 3849+10kbС>Т), c.472_473insA (604insA), c.3816_3817delGT (3944delGT), c.3587C>G (S1196X), c.489+1G>T (621+1G>T), c.274G>A (E92K), c.3140-26A>G (3272-26A>G), c.3883delA (4015delA), c.3890_3891insT (4022insT)). Данные мутации составляют около 77% от общего числа поврежденных хромосом.

Показания к исследованию:

• наличие отклонений в спермограмме: олигоастенотератозооспермия, изолированная олигозооспермия, азооспермия неясного генеза, сниженный объём семенной плазмы, отсутствие или низкая концентрация фруктозы, патологическая вязкость эякулята;
• определение риска рождения ребенка с муковисцидозом при планировании семьи.