Исследование популяций лимфоцитов крови: T-лимфоциты (CD3+CD19-), T-хелперы (CD3+CD4+CD45+), T-цитотокс. (CD3+CD8+CD45+), T-reg. (CD4+CD25brightCD45+), активированные (CD3+HLA-DR+CD38+), (количеств.)

Метод исследования: проточная цитометрия, иммунофенотипирование

Данное исследование включает в себя определение абсолютных и относительных значений субпопуляционного состава Т-лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD45), количества Т-регуляторных лимфоцитов (T-reg. Cells) соотношения Т – хелперы/Т – цитотоксические клетки и Т-клеток, несущих на своей поверхности маркеры активации CD38, HLA-DR. Рекомендуется к назначению для контроля показателей клеточного звена иммунной системы в динамике после комплексного иммунологического обследования.

Т-клетки - это клетки крови (разновидность лейкоцитов), которые действуют, атакуя (прямо или косвенно) вторгающиеся патогены и клетки-хозяева, в зависимости от типа активированных Т-клеток. Т-клетки отличаются от других лимфоцитов тем, что у них есть Т-клеточный рецептор на поверхности, который отсутствует в других лимфоцитах. Т-клеточное звено иммунитета является одним из важнейших реакций иммунного ответа. Т - клетки можно отличить от других лимфоцитов, их созревание и дифференцировка происходит в тимусе, а синтез – в костном мозге. Они составляют около 60-70% от общего количества лимфоцитов.

Иммунофенотипирование – определение и дифференциация клеток при помощи моноклональных антител или каких-либо других зондов, позволяющих судить об их типе и функциональном состоянии по наличию того или иного набора клеточных маркеров. Иммунофенотипирование лейкоцитов проводят с помощью моноклональных антител, меченных светящейся меткой (флюоресцентом) и направлено на обнаружение на их поверхности маркеров дифференциации, или CD-антигенов. Дифференциации этих антигенов изучены и стандартизованы, им присвоены определенные номера. Используя флюоресцентно-меченые моноклональные антитела, связывающиеся с определенными CD, проводится подсчёт содержания лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям.

СD3 - общее количество зрелыхТ-лимфоцитов в крови (абсолютное количество). В основе многих заболеваний лежит патология Т-лимфоцитов, которая в одних случаях непосредственно связана с их поражением, а в других опосредована через нарушение иммунорегуляции. Снижение абсолютного количества Т-лимфоцитов в крови свидетельствует о недостаточности клеточного иммунитета, повышение - о гиперактивности иммунитета и наличии иммунопролиферативных заболеваний. Развитие любого воспалительного процесса практически на всем его протяжении сопровождается снижением содержания Т-лимфоцитов. На количество СD3, кроме заболеваний,  влияют и ряд других факторов (ионизирующее излучение, пожилой возраст, стресс, травмы, недостаточность питания (дефицит белков и калорий), прием лекарственных препаратов (глюкокортикоиды, иммунодепрессанты, цитостатики).

Количественная оценка субпопуляции CD3+ лимфоцитов необходима при:
 

• первичных и вторичных иммунодефицитах;
• острых вирусных инфекциях, включая ВИЧ;
• внутриклеточных бактериальных и паразитарных инфекционных заболеваниях (туберкулез);
• злокачественных новообразованиях;
• трансплонтациях;
• лимфопролиферативных расстройствах (острый Т-лимфобластный лейкоз).

Т-хелперные клетки (Т-хелперы, Th-клетки) или CD4+ Т-клетки, классифицированные как таковые из-за белка CD4 на их поверхности, считаются «вспомогательными» Т-клетками, поскольку они не нейтрализуют инфекции, а скорее запускают реакцию организма на инфекции. В ответ, CD8+ Т-клетки играют роль «клеток-убийц», производя вещества (цитотоксины), которые в конечном итоге приводят к апоптозу инфицированных/дисфункциональных клеток-мишеней. Основная роль CD4+ заключается в регуляции адаптивного иммунного ответа, секреции цитокинов для управления иммунологическими процессами, стимуляции созревания В-клеток и активации цитоксических Т-клеток (CD8) и макрофагов. CD4+Т-клетки составляют примерно две трети от общей популяции Т-клеток.

Использование МКА к CD4 антигену дает возможность количественно охарактеризовать особый клон клеток, получивших название Т-хелперов/индукторов. СD4+ клетки в функциональном отношении делятся на два вида хелперных лимфоцитов: Т-хелперы 1-го порядка (Th1-клетки) и 2-го порядка (Th2-клетки). Различные CD4+ Т-клетки продуцируют разные наборы цитокинов. Th1-клетки (их называют еще клетками гиперчувствительности замедленного типа – ГЗТ) – цитокины для клеточного иммунного ответа: интерлейкин 2 (IL-2), IL-3, g-IFN, TNF-a, TNF-b. А Th2 секретируют набор цитокинов, необходимый для гуморального иммунного ответа: IL-3, 4, 5, 6, 10, 13, TNF-b.

Определение количества CD4+ клеток имеет значение в диагностике состояний, связанных с дефектами антителопродукции и реакций клеточноопосредованного иммунитета. Показателю числа CD4+ клеток отводится решающая роль для прогноза течения ВИЧ-инфекции.

T-цитотоксические клетки CD8+ - исполнители клеточного иммунного ответа. Они проводят антиген-специфическое уничтожение, играют важную роль в иммунной защите от внутриклеточных патогенов, таких как вирусы и бактерии, а также от опухолей. Подобно вспомогательным CD4+ они образуются в тимусе и экспрессируют Т-клеточный рецептор (TCR). Однако, в отличие от CD4+ Т-клеток, они экспрессируют CD8 - корецептор T-клеточного рецептора на своей поверхности и реагируют на чужеродные антигены, представленные на MHC класса I. Стоит отметить, что эффекторная (цитотоксическая) функция CD8+ Т-лимфоцитов проявляется после активации наивных CD8+ Т-лимфоцитов (т.е. после контакта с антигенпрезентирующей клеткой).

Показаниями к определению CD8 являются вирусные инфекции. Значение имеет соотношение между CD4- и CD8-субпопуляциями Т-лимфоцитов (иммунорегуляторный индекс CD4/CD8); например, прогрессирующее снижение иммунорегуляторного индекса у ВИЧ-инфицированных больных может свидетельствовать о переходе в СПИД;важен показатель при злокачественных новообразованиях; используется для оценки эффективности вакцинации (в особенности противовирусными вакцинами).

T-регуляторные клетки (Treg) способны ингибировать иммунологические ответы и поддерживать иммунологический гомеостаз, предотвращая аутоиммунные реакции против аутоантигенов. Они играют роль при нескольких аутоиммунных заболеваниях, таких как рассеянный склероз (РС), аутоиммунный диабет 1-го типа, воспалительные заболевания кишечника (ВЗК), тяжелые формы аллергии (в т. ч. атопический дерматит), ревматоидный артрит, иммунная дисрегуляция, полиэндокринопатии, энтеропатии, Х-хромосомный синдром и псориаз. Регуляторные Т-клетки составляют от 5% до 10% CD4 + Т-клеток у здоровых взрослых. Они экспрессируют маркеры активации, такие как CD152, α-рецептор IL-2 (CD25), OX-40 и L-селектин . Они считаются анергическими при отсутствии IL-2, что делает их зависимыми от IL-2, секретируемого другими клетками. По своему механизму действия и происхождению они представляют гетерогенную популяцию клеток, которую можно разделить на две части: природные клетки Treg тимусного происхождения и индуцированные клетки Treg, дифференцированные по периферии.

Продукция клеток Treg необходима для предотвращения аутоиммунных заболеваний и предотвращения длительных иммунопатологических процессов и аллергий. Они также необходимы для стимулирования толерантности к аллогенным трансплантатам, а также толерантности плода во время беременности. Клиническая значимость этих клеток показана у пациентов с мутациями гена FOXP3, у которых развивается иммунодефицит, связанный с хромосомой X. Эта аутоиммунная полиорганная болезнь требует трансплантации костного мозга в раннем детстве.

В периферической крови человека 15-30% всех CD45+ лейкоцитов являются Т-клетками, при этом CD4+Т-клетки составляют примерно две трети от общей популяции Т-клеток, а CD8+Т-клетки составляют оставшуюся треть. Распознавание антигена приводит также к образованию Th1-клеток памяти, которые экспрессируют характерный маркер CD45RO/

Молекулы HLA II класса экспрессируются на поверхности В-лимфоцитов, антигенпрезентирующих клеток и активированных Т-лимфоцитов. Функция молекул HLA II класса заключается в презентации экзогенных антигенов Т-хелперам. Анти-HLA-DR реагирует только с эпитопом HLA-DR и не имеет перекрестных реакций с молекулами HLA-DQ и HLA-DP. Он экспрессируется на В-лимфоцитах, моноцитах, макрофагах, активированных Т-лимфоцитах. Имеются данные о том, что молекула HLA-DR экспрессируется примерно на 10 % Т-лимфоцитах,  однако при активации клеток митогеном количество и плотность ее экспрессии резко возрастает. Существует предположение, что молекула HLA-DR на Т-клетках может выступать в качестве рецептора, участвующего в трансдукции сигнала активированными Т-лимфоцитами. HLA-DR также может присутствовать на клетках эпителия тимуса, на клетках В-лимфоцит-зависимых полей селезенки и лимфатических узлов, В-клеточной лимфомы.

CD25 антиген известен как низкоаффинный рецептор ИЛ-2, имеющий молекулярную массу 55 кД. Молекула CD25, ассоциированная с b-цепью (CD122) и общей g-цепью (CD132), формирует высокоаффинный комплекс рецептора ИЛ-2. В процессе воспаления может вырабатываться растворимая форма ИЛ-2R. Маркер CD25 присутствует на субпопуляцях Т- и В-лимфоцитов периферической крови, в том числе на активированных макрофагах.

Данное исследование позволяет определить количественное соотношение основных популяций Т-лимфоцитов:
 

• Т-лимфоциты (CD3+CD19-);
• Т-хелперы/индукторы (CD3+CD4+CD45+);
• Т-цитотоксические лимфоциты (Т-ЦТЛ) (CD3+CD8+CD45+);
• соотношение Т-хелперы/ Т-цитотоксические лимфоциты (CD3+CD4+/ CD3+CD8+).
• малые клеточные популяции, а также изучить их функциональную активность:
• активированные Т-лимфоциты (CD3+HLA-DR+CD45+);
• регуляторные Т-хелперные клетки (CD4+CD25brigCD45+), выполняющие иммуносупрессорную функцию
• активированные цитотоксические Т-лимфоциты (CD3+CD8brightCD38+) (% от всех Т-лимфоцитов)
• активированные Т-лимфоциты, экспрессирующие a-цепь рецептора ИЛ-2 (CD3+CD25+CD45+).

Показания к назначению:

• частые ОРВИ, хронические инфекции ЛОР-органов (гнойные синуситы, отиты, периодически встречающиеся лимфадениты, пневмонии с тенденцией к рецидивированию, бронхоплевропневмонии);
• бактериальные инфекции кожи и подкожной клетчатки (пиодермии, фурункулез, абсцессы, флегмоны, септические гранулемы, рецидивирующий парапроктит у взрослых);
• урогенитальные инфекции;
• грибковые поражения кожи и слизистых оболочек, кандидоз, паразитарные инвазии;
• рецидивирующий герпес различной локализации;
• хронические заболевания желудочно-кишечного тракта с частыми обострениями, гастроэнтеропатия с хронической диареей неясной этиологии, дисбактериозом;
• генерализованные инфекции (сепсис, гнойные менингиты).
• атопический дерматит; нейродермит; экзема с инфекционным компонентом; тяжелая атопическая бронхиальная астма, поллиноз, хронический астматический бронхит.
• аутоиммунные заболевания: ревматоидный артрит; рассеянный склероз; диффузные заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, склеродермия, дерматомиозит); аутоиммунный тиреоидит; неспецифический язвенный колит; сахарный диабет
• опухолевые процессы в иммунной системе (лимфомы, болезнь Ходжкина, острый и хронический лимфолейкоз, саркома Капоши).

Референсные значения указываются с учетом возраста, пола.