Посев грудного молока на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антимикробным препаратам

Метод исследования: бактериологический. Идентификация микроорганизма проводится методом масс-спектрометрии на приборе Microflex Brucker методом MALDI TOF.

Грудное молоко – идеальный источник питания новорожденных. Но даже при правильном уходе и гигиенических процедурах молочная железа может быть заражена бактериями.

В связи с возможным возникновением мастита в послеродовом периоде повышается возможность передачи возбудителя инфекции ребенку с грудным молоком. Этиология маститов может быть различной, однако ведущее значение остается за Staphylococcus  aureus (золотистый стафилококк). В настоящее время доказано, что грудное молоко не является стерильным продуктом и в норме содержит различные бактерии: эпидермальные стафилококки, лактобациллы, бифидобактерии, энтерококки и др. Оно может быть инфицировано условно-патогенными и патогенными возбудителями, среди которых по частоте встречаемости доминирует Staphylococcus  aureus  (золотистый стафилококк).

Стафилококки – грамположительные аэробные микроорганизмы. Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк) наиболее патогенный; он относится к грамположительным коккам . Грудное молоко редко служит источником инфицирования кишечника грудных детей, однако при употреблении грудного молока, инфицированного S. aureus в количестве > 400 КОЕ/мл, у детей возникает риск колонизации стафилококком.

Около 30% здоровых взрослых, часто временно, являются носителями стрептококков в носо- и ротоглотке, около 20% – на коже.  Высокий уровень носительства золотистого стафилококка отмечается у персонала больниц и пациентов стационаров, роддомов. Он относится к  условно-патогенным  микроорганизмам на неповрежденной коже и слизистых оболочках.

У мамы  симптомы стафилококковой инфекции могут проявляться в виде высокой температуры, болей  в молочной железе, покраснения и отека кожных покровов молочной железы, а также симптомов интоксикации. Проникнув в молочную железу, может вызвать гнойный мастит у кормящей мамы. А попав в организм малыша вместе с грудным молоком, стафилококк может вызвать такие заболевания, как:

• энтероколит (частый, жидкий, водянистый стул, боль в животе, повышение температуры, частые срыгивания, рвота);
• гнойные воспаления на коже;
• явления кишечного дисбиоза (учащенный стул, избыточное газообразование, сопровождающееся вздутием живота и отхождением большого количества газов во время дефекации, частые срыгивания, появление в кале непереваренных комочков, изменение цвета кала – желто-зеленый, цвет болотной тины).

У ребенка симптомы могут проявляться  в виде частых колик, реакции на коже,  температуры, нарушения сна и питания. Заражение опасными штаммами стафилококка у детей представляет опасность для здоровья. Инфекция распространяется контактным, пищевым, воздушно-капельным путями. Младенцы могут заразиться через руки матери, медицинского персонала, грудное молоко, предметы ухода. Вызывается заболевание путем прямого проникновения в ткань или при  продукции экзотоксина. Прямое проникновение в ткань является наиболее распространенным механизмом возникновения стафилококковых заболеваний, включая инфекции кожи.

Диагноз ставится на основании результатов культурального исследования.

Носительство золотистого стафилококка достаточно распространено. Более того, оно часто бессимптомно. Так, при исследованиях выявлено, что в 87,2% случаев у женщин с бактериолактией жалоб не было. У 5,1% матерей имеются проявления лактостаза, у 7,7% — трещины сосков. У всех матерей с инфицированием грудного молока выявлено носительство S. aureus на слизистой зева и (или) носа. При этом колонизация кишечника установлена у 74,3% детей, получавших инфицированное грудное молоко, и у 61,8% детей, употреблявших стерильное молоко. Наиболее частым вариантом развивающейся стафилококковой инфекции у детей, получающих инфицированное грудное молоко, является легкая форма стафилококкового энтероколита. В единичных случаях (14,3%) — среднетяжелая или легкая его форма в сочетании со стафилодермией. Все среднетяжелые формы энтероколита были обусловлены ассоциацией S. aureus с грамотрицательными энтеробактериями.

Грудное молоко редко служит источником инфицирования кишечника грудных детей, однако при употреблении грудного молока, инфицированного S. aureus в количестве > 400 КОЕ/мл, у детей возникает риск колонизации стафилококком.

Факторы риска инфицированности:

• новорожденные младенцы и кормящие матери;
• сниженный иммунитет, наличие инфекции мягких тканей;
• принимающие глюкокортикоиды, иммуносупрессанты.

Показания к исследованию:

• воспалительные заболевания кожи;
• подбор и/или контроль лечения бактериофагами.
   

Включает бактериоскопическое исследование биоматериала, выделение и идентификацию до вида этиологически значимого возбудителя,  определение антибиотикочувствительности.

Этиологически значимыми микроорганизмами в данном биоматериале являются:

• Стафилококк (Staphylococcus aureus);
• Streptococcus agalactiae;
• Энтеробактерии (Escherichia coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp., Proteus spp. и т.д.);
• Неферментирующие грамотрицательные бактерии (Pseudomonas spp., Acinetobacter spp. и т.д.).

Микробиологическое исследование, позволяющее выявить инфицированность золотистым стафилококком и определить количество возбудителя.
Золотистые стафилококки (Staphylococcus aureus) – грамположительные условно-патогенные бактерии рода Staphylococcus, являющиеся наиболее частой причиной стафилококковых, в частности внутрибольничных, инфекций. Золотистые стафилококки в норме могут располагаться на коже, слизистой оболочке носа и реже в гортани, влагалище, кишечнике. Они встречаются у 30 % здоровых людей.
Если у человека слабая иммунная система или нарушен нормальный состав микрофлоры, то при повреждении кожи (слизистых оболочек) золотистый стафилококк может приводить к разнообразным местным и системным инфекционно-воспалительным поражениям:

• кожи (карбункулам, импетиго, фолликулиту),
• молочных желез (маститу),
• дыхательных путей и ЛОР-органов (тонзиллиту, гаймориту, отиту, фарингиту, лариноготрахеиту, пневмонии),
• мочевыводящих путей (уретриту, циститу, пиелонефриту),
• пищеварительной системы (энтеритоколиту, аппендициту, перитониту, парапроктиту, холециститу),
• костно-суставной системы (остеомиелиту, артриту).

В отдельных случаях возможна генерализация инфекции с развитием септикопиемии. Производимый золотистым стафилококком энтеротоксин вызывает пищевые отравления и синдром токсического шока. Основные источники инфекции: здоровые (носители) и больные люди, домашние и сельскохозяйственные животные, а также пища, содержащая возбудителя инфекции (чаще всего это сахаросодержащие молочные продукты). Инфицирование может происходить контактным и воздушно-пылевым путем. Возможно аутоинфицирование.
Для идентификации золотистого стафилококка проводится посев клинического материала на питательные среды, где при наличии S. aureus через 18-24 часа наблюдается рост колоний золотистого цвета.
Определение количества бактерий может потребоваться, например, чтобы понять, нужно ли проводить лечение: в некоторых случаях, если количество небольшое, лечение не проводится. Решение о его необходимости зависит от клинических проявлений, а также от количества стафилококка. При небольшом содержании микробов и отсутствии симптоматики лечение может вообще не понадобиться, т. к. и в норме на слизистой могут находиться эти микробы. Стафилококк в кишечнике обнаруживается постоянно, это не повод для лечения, но если его количество превышено, тогда нужны меры (бактерия может вызывать колики и расстройства). Стафилококк в мазке без симптомов вагинита также является нормой, в то время как большие количества стафилококка в мазке, наряду с повышением лейкоцитов, требуют лечения.
Наличие стафилококка не обязательно означает инфекцию, это может быть бессимптомное носительство, например при посеве мазков из носа и зева носительством считается количество бактерий до 103. Однако более высокие показатели говорят нам о золотистом стафилококке как о причине заболевания, и это уже далеко не бессимптомное носительство.
Многое зависит от возраста пациента. Например, золотистый стафилококк в количестве 104 является вполне нормальным показателем для детей старше 1 года, но у грудных детей в таком количестве уже потребует лечения.
В любом случае наличие стафилококка при отсутствии симптомов болезни – еще не повод к назначению лекарств.
Количество стафилококка может определяться до и после лечения. Если выясняется, что рост возбудителя обильный, значит, инфекция набирает обороты, предыдущая терапия была неудачной и срочно требуется новый курс лечения; умеренный и скудный рост микроорганизмов по результатам последних анализов говорит об успешности терапии. Кроме того, в дальнейшем необходимо контролировать количество стафилококков в течение 1 или 2 месяцев после пройденного лечения.
Отмечено также, что после пребывания больных в хирургической клинике стафилококк обнаруживался у них вдвое чаще, чем при поступлении. У больных, поступающих в стационары, наблюдается замена антибиотикочувствительных стафилококков на антибиотикоустойчивые.
Лечение больных стафилококковой болезнью препаратами пенициллина или другими давно применяемыми антибиотиками часто остаётся безрезультатным, поскольку такие препараты нередко только усугубляют тяжесть течения инфекции. Поэтому так важно установить, какие антибиотики будут эффективны при лечении стафилококка.

Используется исследование:

• Для определения целесообразности лечения.
• Для дифференциации бактерионосительства и опасного инфицирования.
• Для контроля за состоянием пациента после проведенного лечения.
• Для того чтобы подтвердить, что стафилококк является причиной возникшего заболевания (об этом свидетельствуют высокие показатели посева).

Одна из ключевых проблем лечения бактериальной инфекции – выбор антибактериального препарата,  соблюдение показаний к их применению, подбор  правильной  дозировки, поскольку возникающая при бесконтрольном лечении антимикробными препаратами резистентность к противомикробным средствам – серьезная проблема, представляющая угрозу для здоровья людей.  Основной целью определения (оценки) чувствительности микроорганизмов к антибиотикам  является прогнозирование их эффективности при лечении инфекций у конкретного пациента.
Для лечения бактериальных заболеваний могут применяться либо антибиотики, либо бактериофаги, либо проводят совместную терапию.
Выбор препаратов для определения антибиотикочувствительности проводится  согласно руководству Европейского комитета  по определению чувствительности к антимикробным препаратам (EUCAST), в котором для каждого вида микроорганизма регламентируется определенный перечень препаратов, чувствительность к которым необходимо проверить. Определение чувствительности к антибиотикам  в лаборатории проводится стандартизованным диско-диффузионным методом. В питательную среду с ранее внесенной бактериальной суспензией помещают  диски с антибиотиками. Проводят инкубацию в течении 18-24 часов.  Вследствие диффузии препарата  происходит подавление роста микроорганизмов, и по диаметру зон задержки роста судят о чувствительности культуры. Интерпретация результатов:  на  бланке теста для каждого препарата  будут обозначения в виде букв R или S или I.  R (Resistant) – резистентность бактерий к данному бактериофагу или антибиотику, S (Sensitive) – чувствительность возбудителя к препарату. Буква I обозначает чувствительность при увеличенной экспозиции препарата.