Посев кала на Candida и определение чувствительности к антимикотическим препаратам

Включает бактериологическое исследование биоматериала, выделение и идентификацию до вида этиологически значимого возбудителя,  определение чувствительности к антимикотическим препаратам.

Метод исследования: бактериологический. Идентификация микроорганизма проводится методом масс-спектрометрии на приборе Microflex Brucker методом MALDI TOF.

Представители рода Candida представляют собой дрожжевые грибы, родственные Ascomycetes. Род Candida включает разнообразные виды (Candida spp.), среди которых основное значение, как возбудители кандидоза, имеют: Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida glabrata, Candida dubliniensis, Candida lusitaniae, Candida krusei.

Candida spp. представляют собой компонент микрофлоры, симбионтной для человека. У 10–25% населения, не имеющих клинических признаков грибкового поражения, Candida spp. непостоянно выявляются в полости рта, у 65–80% – в содержимом кишечника. Candida spp. обнаруживаются в детрите гастродуоденальных язв примерно в 17% случаев.

По современным представлениям, в нормальных условиях основным «местом обитания» Candida spp. в организме человека является кишечник. В микробной популяции кишечника доля этих грибов ничтожно мала. Рост колоний Candida spp. в организме человека отчасти регулируется благодаря работе звеньев иммунитета. Главное место в этом процессе занимают звенья неспецифического иммунитета – мононуклеарные фагоциты (моноциты/макрофаги) и полиморфноядерные лейкоциты.

Грибы рода Candida обладают способностью к адгезии (прикрепления) к эпителиальным клеткам слизистой. Способность к адгезии у представителей различных видов Candida значительно различается; наиболее высока эта способность у C.albicans, C.tropicalis, C.dubliniensis; наименьшая – у Candida glabrata, Candida krusei. В качестве защитного барьера, препятствующего прикреплению микроба к слизистой оболочке, важную роль играет муцин – гликопротеин клеточной стенки эпителиальных клеток. Как фактор вирулентности также рассматривают способность к быстрому образованию нитей псевдомицелия. Эта особенность в наибольшей степени выражена у C.albicans.

Нормальная микрофлора, населяющая просвет желудочно–кишечного тракта, вырабатывает вещества с антибактериальной активностью, которые предотвращают избыточный рост, развитие условно–патогенной флоры. Кишечные палочки, энтерококки, бифидобактерии и лактобациллы обладают наиболее выраженными антагонистическими свойствами.

Термин «кандидоз» подразумевает патологический процесс, основу которого составляет избыточный рост Candida первично в желудочно–кишечном тракте и вторично – в других органах. Кандидоз кишечника представляет собой прогрессирующий рост Candida albicans, демонстрирует пример оппортунистической инфекции, развивающейся в условиях сниженной иммунной толерантности организма.

Факторы риска развития кандидоза:

• физиологический иммунодефицит (период новорожденности и ранний детский период, пожилой возраст, беременность, стрессовые состояния);
• врожденный иммунодефицит (синдром Ди– Джорджи, Незелофа, Шедиака–Хигаши и др.);
• ВИЧ-инфекция;
• онкологические заболевания, химиотерапия;
• аутоиммунные и аллергические заболевания, сахарный диабет, лечение глюкокортикостероидами;
• трансплантация органов;
• хронические заболевания, в том числе патологические состояния, сопровождающиеся снижением кровоснабжения кишечника. Нарушение переваривания и всасывания сопровождается избыточным ростом микроорганизмов в просвете кишечник;
• антибиотикотерапия. Полагают, что примерно в трети случаев развитие идиопатической антибиотикоассоциированной диареи обусловлено именно кандидозом кишечника;
• несбалансированное питание (дефицит в рационе белков, витаминов).

Различают инвазивный и неинвазивный кандидоз.

Инвазивный кандидоз обусловлен внедрением нитчатой формы гриба Candida в ткани. Первым этапом кандидоза, как инфекционного процесса, служит адгезия к эпителиоцитам, затем происходит внедрение кандиды в эпителиальный слой. Этим обусловлены эрозивно–язвенные дефекты стенки кишечника различного размера и формы, трещины, полиповидные или сегментарные циркулярные образования.Инвазивный кандидоз чаще наблюдается в органах, выстланных многослойным плоским эпителием (полость рта, пищевод), и реже – цилиндрическим эпителием (желудок, кишечник), что, вероятно, связано с особенностями местной иммунной защиты.

Неинвазивный кандидоз не сопровождается превращением грибка в нитчатую форму; наблюдается избыточный рост его колоний в просвете полого органа – кишечника. При этом имеет нарушение полостного и пристеночного пищеварения, проникновение в системный кровоток микробных компонентов и метаболитов, развитие в той или иной степени выраженной системной иммунно–воспалительной реакции.

Эффективным методом идентификации кандид является культуральный метод исследования — посев биоптата слизистой оболочки на питательной среде Сабуро, позволяющим не только выявить грибы, но и определить чувствительность к антимикотическим препаратам, что важно для эффективного лечения.

Показания к исследованию:

• диагностика  кандидоза
• дифференциальная диагностика
• подбор противогрибковой терапии

Этиологически значимыми микроорганизмами в данном биоматериале являются:

• Грибы рода Candida.

Тесты по определению чувствительности к противогрибковым препаратам выполняют в отношении дрожжевых возбудителей микозов, если вызванная ими инфекция имеет тяжелое течение, если отмечается неэффективность начальной терапии, или же у пациента возникает
рецидив заболевания, а также, если наличие резистентности невозможно определить на основании идентификации вида возбудителя.
Используются тест-системы производства  компании Bio-Rad в виде микропланшетов, в лунках которых содержатся две  концентрации  шести антигрибковых препаратов. Тестирование грибковой суспензии на чувствительность проводится в течение 48часов. Чувствительность или устойчивость препарата определяется по восстановлению цветового индикатора, находящегося в лунках микропланшета.